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RASSF5

Maxp1 | NORE1 | NORE1A | NORE1B | RAPL | RASSF3; Ras协会(RalGDS / AF-6)域家庭成员5;RASSF5; Ras协会(RalGDS / AF-6)域家庭成员5

Rap1-binding蛋白质| Ras协会(RalGDS / AF-6)域家庭5 | Ras effector-like蛋白质新Ras效应1 | |小说Ras效应1 | Ras协会domain-containing蛋白5 |调节器在淋巴组织细胞粘附和极化纯度|肿瘤

1 q32.1

蛋白质编码

Ras癌基因蛋白调节多种生物效应通过激活多种效应器。经典,Ras激活与增强细胞增长和转型。然而,形式的Ras激活也可能抑制经济增长通过诱导衰老,细胞凋亡和分化。诱导细胞凋亡的Ras可能由其效应RASSF1,似乎作为肿瘤抑制或。我们现在表明,Ras效应Nore1 RASSF1结构相关,还可以调解Ras-dependent细胞凋亡。此外,Nore1蛋白质的分析表达式显示,它常常被抑制在肺肿瘤细胞系和主肺肿瘤。像RASSF1,这与Nore1启动子的甲基化,而不是基因删除。最后,re-introduction Nore1,由自己的启动子,会损害人类的增长在软琼脂肺肿瘤细胞系。因此,我们建议Ras效应Nore1属于一个家庭的Ras效应/肿瘤抑制或年代,包括RASSF1。

NORE1A增长和肿瘤抑制或这是灭活的癌症年代。NORE1A可以绑定到活跃的Rasonco基因产品。然而,逮捕NORE1A-induced增长的机制和肿瘤抑制离子是未知的。使用anchorage-independent增长化验,我们绘制了NORE1A效应域(蛋白质的最小区域经济增长——负责抑制我影响)片段包含中央和Ras协会域NORE1A氨基酸(191 - 363)。表达式NORE1A效应领域的肺腺癌A549细胞导致选择性抑制通过ERK信号转导通路。长篇NORE1A(416个氨基酸)及其片段的能力增长抑制离子局部中心体,微管在正常和Ras-independent的方式改变了人类细胞。突变是缺乏约束力的中心体和微管也缺乏诱导细胞周期阻滞。这表明,细胞骨架本地化需要增长抑制我NORE1A的影响。Ras增长——所需的绑定函数抑制我的全身NORE1A增长——但不是抑制我的影响效应域。我们的研究表明,协会与细胞骨架元素NORE1A NORE1A-induced增长至关重要抑制离子,兵通路是NORE1A增长的目标-抑制我的活动。

背景/目的:在人类肝细胞癌(HCC) ras-proto -onco基因很少突变。因此,我们研究了可能的失活——假定的肿瘤抑制口服补液盐和ras-associating蛋白质、NORE1A NORE1B, RASSF1A基因在肝细胞癌突变或epi基因抽搐基因沉默通过promoter-CpG甲基化。方法:SSCP-analyses、测序和methylation-specific PCR进行28纤维化/ 40肝硬化肝脏和肝细胞癌。结果:NORE1A / B的顺序没有偏差,RASSF1A基因的展出基因non-silent多态性(大约10%的病例)和一个错义突变(HCC)。RASSF1A基因的改变可能会影响阻碍增长能力。Epi基因抽搐的失活NORE1B被发现在62%的肝癌和hepatocarcinoma-cell行由于相当大的启动子甲基化的基因。甲基化检测RASSF1A基因在肝细胞癌和肝癌细胞系。因此,肝癌透露epi的97%基因抽搐NORE1B沉默,RASSF1A基因,或两者兼而有之。相比之下每三纤维化或肝硬化肝脏只有表现出沉默的一个或两个基因年代。结论:候选人肿瘤抑制或基因epi NORE1B和RASSF1A基因基因用衰减独自在至少62%,或97%的肝癌研究相结合。这表明hepatocarcino频繁和重要事件基因姐姐,这可能允许hcc subverse增长控制在一个不变的Ras。

Ras蛋白调节范围广泛的生物过程与各种效应的蛋白质相互作用。除了在tumorigensis已知作用,Ras的活性形式展示growth-inhibitory影响未知的机制。几个Ras效应蛋白确定为介质的细胞凋亡和细胞循环逮捕也展现出属性通常与肿瘤抑制或蛋白质。在这里,我们表明,Ras效应RASSF5 / NORE-1结合k - Ras基因强烈但弱h和n。RASSF5发现定位在细胞核和核仁相比其他Ras效应蛋白,RASSF1C RASSF2,本地化的细胞核和核仁排除在外。50个氨基酸残基转移arginine-rich核仁的定位信号(NoLS)中确定RASSF5能够与importin-beta交互和运输货物到核仁。令人惊讶的是,类似arginine-rich RASSF1C信号识别和RASSF2与importin-alpha和运输的异源细胞质蛋白核。有趣的是,突变精氨酸残基的这些核目标信号阻止Ras效应蛋白的相互作用与各自的运输受体和废除其核易位。这些研究结果首次提供证据,arginine-rich信号能够识别不同的核受体和运输RASSF蛋白导入不同的亚细胞隔间。此外,我们的数据表明,核本地化RASSF5其细胞生长控制活动是至关重要的。在一起,这些数据表明,Ras效应总科的运输蛋白在细胞核、核仁可能在调制Ras-mediated发挥至关重要的作用在肿瘤细胞增殖基因sis。

在假定的肿瘤抑制或NORE1A (RASSF5)是一个Ras协会会员家人和通常被灭活在人类领域癌症。密切相关的基因家庭成员和功能性合作者RASSF1A基因是一个真正的肿瘤抑制或经常参与神经母细胞瘤。在目前的研究中,我们试图调查NORE1A人类神经母细胞瘤的作用。一组肿瘤(36神经母细胞瘤和4星形胶质细胞瘤)和神经母细胞瘤细胞系是NORE1A评估基因表达式由Taqman定量rt - pcr。启动子甲基化定量确定了甲基化敏感的焦磷酸测序。antitumourigenic角色功能调查在Nore1a转染SK-N-BE(2)细胞的荧光抑制半胱天冬酶活性和BrdU公司化验。神经母细胞瘤细胞显示很低或没有NORE1A mRNA表达式,不能逆转trichostatin或者5-aza-cytidine治疗。神经母细胞瘤肿瘤显示抑制ed NORE1A基因表达式尤其明显的情况下没有MYCN放大或1 p的损失。NORE1A启动子的甲基化是不观察原发性肿瘤和七个神经母细胞瘤细胞系中只有一个显示弱部分甲基化。瞬态表达式Nore1a导致增强的细胞凋亡和延迟细胞周期进程。总之NORE1A似乎强烈抑制艾德neuroblastic肿瘤和调整的表达式减少肿瘤发生的表型。催化剂甲基化不是一个共同负责NORE1A转录机制抑制离子在这个肿瘤类型。

最近,我们发现epi基因抽搐沉默的Ras效应基因年代NORE1B和/或RASSF1A基因在肝细胞癌(HCC)调查的97%。这是强有力的证据表明,这两种基因在hepatocarcino具有重大意义基因sis。尽管RASSF1A基因作为肿瘤抑制或基因NORE1B的功能在很大程度上是未知的。在这里,我们研究了细胞增长NORE1B和转换的作用。了解分子的作用机制基因,我们使用了野生型形式和删除突变体没有NH(2)终点站和中央域,Ras协会(RA)域或COOH-terminal SARAH-domain。完整的RA和SARAH-domains被发现NORE1B所必需的(a)增加G (0) - G(1)分数在肝癌细胞中,(b)抑制原癌基因/ Ha-Ras-induced细胞转换和(c)与RASSF1A基因密切互动,确定与荧光共振能量转移。在进一步的研究中,细胞周期延迟NORE1B同样有效的肝细胞细胞系野生型和突变体Ras表明NORE1B并不与Ras。总之,NORE1B抑制es细胞的复制和转换有效RASSF1A基因,因此是一个假定的肿瘤抑制或基因。NORE1B身体与RASSF1A基因交互和功能丧失的一个互动合作伙伴可能会导致肝细胞不受控制的增长和转型。这也许可以解释epi频繁基因抽搐沉默NORE1B和/或RASSF1A基因在肝细胞癌。

NORE1A Ras-binding蛋白,属于一群肿瘤抑制或年代称为Ras协会域的家庭。他们的增长-和肿瘤抑制我函数被认为是依赖与微管细胞骨架。然而,详细了解这种相互作用是失踪。在这里,我们表明,NORE1A直接与微管蛋白相互作用和成核微管的能力。引人注目的是,刺激成核的能力是通过磷酸化调控双重特定方式Ras-binding域内的NORE1A极光激酶或通过绑定到Ras激活。我们也证明NORE1A协调- Ras激活对微管成核的影响。我们的研究结果的基础上,我们提出一种新颖的监管网络组成的肿瘤抑制或NORE1A,有丝分裂激酶极光,小GTPase Ras和微管细胞骨架。

Epi基因抽搐的沉默RASSF (Ras协会域家庭)基因年代RASSF1和RASSF5 CpG甲基化(也称为NORE1)的发现经常在许多癌症年代。尽管RASSF1的生理作用研究在一些细节,RASSF5的确切功能不是很好理解。在这里,我们表明,RASSF5扮演着一个重要的角色在应对死亡受体配体介导细胞凋亡,tnf和TNF-related凋亡诱导配体。损耗的RASSF5 siRNA显著降低TNF-alpha-mediated细胞凋亡,可能通过其互动proapoptotic激酶MST1,河马的哺乳动物相同器官。与此一致的是,核MST1击倒也导致TNF-alpha-induced凋亡阻力。进一步研究Rassf5体内的作用,我们基因额定Rassf5-deficient鼠标。失活的Rassf5小鼠胚胎成纤维细胞(mef)导致抗tnf -和TNF-related凋亡诱导ligand-mediated细胞凋亡。重要的是,Rassf5-null老鼠更耐TNF-alpha-induced凋亡,未能激活Mst1。Rassf5损失也导致自发不朽mef比控制mef段落,早些时候Rassf5-null mef名垂千古,但不是永生的野生型mef,被K-RasG12V完全改变了。在一起,我们的结果表明直接作用RASSF5 ligand-mediated死亡受体凋亡和RASSF5作为提供进一步的证据肿瘤抑制或。